Investigation of Tritrichomonas foetus in cryopreserved bovine semen by culture and polymerase chain reaction / Pesquisa por Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado mediante isolamento e reação em cadeia da polimerase

Bovine Trichomoniasis (BT) is an infectious disease caused by Tritrichomonas foetus that can be transmitted either sexually or by fomites. In males, the disease is asymptomatic and permanent. T. foetus has been detected in semen samples where it is able to remain viable even when frozen. The objective of this study was to investigate the presence of T. foetus in 27 samples of commercial frozen bovine semen by culture and Polymerase Chain Reaction (PCR). Samples were thawed in water at 37°C. Part of the samples was inoculated in a test tube containing Diamond's medium and incubated at 35°C. Growth was evaluated every 24 hours via direct examination under a microscope. The other part was placed in an Eppendorf tube and frozen for later molecular analysis. After 10 days of culture, all samples were negative for T. foetus. The Quick-DNA Miniprep Kit (Zymo Research) without proteinase K was used for DNA extraction. The primers used in PCR were TRF3 and TRF4. PCR results were negative for all samples. In conclusion, bovine semen samples were negative for T. foetus in both diagnostic methods, according to the adopted methodology.(AU)

A tricomonose genital bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo Tritrichomonas foetus, é transmitida por via venérea e fômites contaminados. Em machos a doença é assintomática e permanente. O agente já foi encontrado em amostras de sêmen e é capaz de permanecer viável quando congelado. Este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino comercial congelado, por meio de cultivo e reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram descongeladas em água a 37ºC; parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliada a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen testado.(AU)

Molecular prevalence of trichomonad species from pet shop puppies and kittens in Japan / Molecular prevalência de espécies trichomonas em filhotes de cães e gatos de pet shop no Japão

Abstract Pentatrichomonas hominis and Tritrichomonas foetus (cat genotype) have been commonly identified as intestinal trichomonads in both dogs and cats. Although P. hominis is considered as non-pathogenic protozoa in many kinds of mammals, it has the potential for zoonotic transmission. T. foetus has been recognized as the emerging causative agent of diarrhea in cats without the risk of zoonotic transmission. As pet shops are the major source of young companion animals, the present study discusses the molecular prevalence of P. hominis and T. foetus from 544 pet shop puppies and 409 kittens. The results suggest that the prevalence of P. hominis (puppies: 7.0%; kittens: 0.5%) and T. foetus (puppies: 0%; kittens: 2.4%) in pet shop young animals are low. In addition, the infections of P. hominis and T. foetus are not always associated with the clinical signs (soft or diarrhea feces).

Resumo Pentatrichomonas hominis e Tritrichomonas foetus (genótipo de gato) têm sido comumente identificados como trichomonas intestinais em cães e gatos. Apesar de P. hominis ser considerado como protozoário não patogênico em muitos tipos de mamíferos, tem potencial para transmissão zoonótica. Enquanto o T. fetus foi reconhecido como o agente causador emergente de diarreia em gatos sem o risco de transmissão zoonótica. Devido às lojas de animais serem as principais fontes de filhotes de animais domésticos, o presente estudo discute a prevalência molecular e/ou o potencial zoonótico de P. hominis e T. foetus em 544 filhotes de cachorro e 409 gatos de "pet shop". Os resultados sugerem que a prevalência de P. hominis (cães: 7,0%; gatos: 0,5%) e T. foetus (cães: 0%; gatos: 2,4%) em animais jovens de "pet shop" é baixa. Além disso, as infecções de P. hominis e T. foetus nem sempre estão associadas aos sinais clínicos (fezes moles ou diarreia).

Detection of enteric agents into a cats' shelter with cases of chronic diarrhea in Southern Brazil / Detecção de agentes enteropatogênicos associados à diarreia crônica em um gatil no Sul do Brasil

This study carried out a survey about enteropathogenic agents in domestic cats' shelter as a stage of investigation for the intermittent chronic diarrhea. Individual fecal samples from 39 cats with free access to the external environment were submitted to parasitological examination, parvovirus, and coronavirus by PCR, and Cryptosporidium spp., Giardia spp. and Tritrichomonas foetus by real-time PCR. From the cats evaluated, 30 (76.9%) were positive for one or more enteric agents, and coinfections were observed in 11 cats samples (28.2%). Helminth eggs were observed in 48.7% of cats (19/30), 16 (41%) were positive for parvovirus or coronavirus and 25.6% (10/30) were infected by protozoa. From the positives for protozoa, five cats were positive to T. foetus (12.82%). The first finding of this protozoan through PCR was in the southern Brazil, and the second was in the whole country. Chronic diarrhea in cats may be multifactorial in shelter animals where the population density is high and the control of parasitic, and viral infections are deficient. Moreover, it is due to poor hygiene conditions in these shelters. The factors associated with the proliferation of infectious diseases in shelters are correlated with new pathogens infections such as T. foetus.(AU)

Uma pesquisa de agentes enteropatogênicos em gatos domésticos de um abrigo foi realizado como etapa da investigação das causas de diarreias crônicas intermitentes. Amostras fecais individuais de 39 gatos, com livre acesso ao ambiente externo, foram obtidas para pesquisa de helmintos através do exame parasitológico, investigação de parvovírus e coronavírus e de Cryptosporidium spp., Giardia spp. e Tritrichomonas foetus através de PCR em tempo real. Dos gatos avaliados, 30 (76,9%) foram positivos para algum ou mais de um destes agentes entéricos. Desses, 11 (28,2%) apresentaram co-infecções parasitárias. Ovos de helmintos foram observados em 48,7% dos gatos (19/30), 16 felinos (41%) foram positivos para parvovírus ou coronavírus e 25,6% (10/30) estavam infectados por protozoários. Dos positivos para protozoários, cinco apresentaram Tritrichomonas foetus (12,82%), um organismo pouco relatado no Brasil, sendo este o primeiro relato de detecção deste protozoário através de PCR em fezes de gatos no Sul do Brasil e o segundo no país. A diarreia crônica em gatos pode ser multifatorial em animais de abrigo onde a densidade populacional é elevada e os meios de controle parasitário e viral são deficitários, além das condições de higiene precárias. Os fatores associados à proliferação de doenças infecciosas em abrigos promovem o surgimento de infecções por novos patógenos como o Tritrichomonas foetus, até então pouco relatado no Brasil.(AU)

What is known about Tritrichomonas foetus infection in cats? / O que sabemos sobre a infecção por Tritrichomonas foetus em gatos?

Abstract Tritrichomonas foetus is a parasite that has been definitively identified as an agent of trichomonosis, a disease characterized by chronic diarrhea. T. foetus colonizes portions of the feline large intestine, and manifests as chronic and recurrent diarrhea with mucus and fresh blood, which is often unresponsive to common drugs. Diagnosis of a trichomonad infection is made by either the demonstration of the trophozoite on a direct fecal smear, fecal culture and subsequent microscopic examination of the parasite, or extraction of DNA in feces and amplification by the use of molecular tools. T. foetus is commonly misidentified as other flagellate protozoa such as Giardia duodenalis and Pentatrichomonas hominis. Without proper treatment, the diarrhea may resolve spontaneously in months to years, but cats can remain carriers of the parasite. This paper intends to serve as a source of information for investigators and veterinarians, reviewing the most important aspects of feline trichomonosis, such as trichomonad history, biology, clinical manifestations, pathogenesis, world distribution, risk factors, diagnosis, and treatment.

Resumo Tritrichomonas foetus é um parasito que foi identificado definitivamente como agente de tricomoníase, caracterizada por diarreia crônica. T. foetus coloniza porções do intestino grosso dos felinos e se manifesta como uma diarreia crônica e recorrente, com muco e sangue, geralmente irresponsiva às drogas comumente usadas no tratamento. O diagnóstico da infecção por tricomonadídeos é feito pela demonstração de trofozoítos no exame direto de fezes frescas, cultura fecal e subsequente exame microscópico ou extração do DNA do parasito na amostra fecal e amplificação, utilizando-se técnicas moleculares. T. foetus é comumente confundido com outros protozoários flagelados, como Giardia duodenalis e Pentatrichomonas hominis. Sem tratamento adequado, a diarreia pode cessar espontaneamente em meses ou anos, porém os gatos podem permanecer portadores do parasito. Esse artigo pretende servir como fonte de informação para pesquisadores e veterinários, revisando os mais importantes aspectos da tricomoníase felina, como histórico, biologia, manifestações clínicas, patogênese, distribuição mundial, fatores de risco, diagnóstico e tratamento.

Detection of natural occurrence of Tritrichomonas foetus in cats in Araçatuba, São Paulo, Brazil / Detecção da ocorrência natural de Tritrichomonas foetus em gatos em Araçatuba, São Paulo

The aim of this study was to investigate the occurrence of Tritrichomonas foetus in cats in the area surrounding the city of Araçatuba municipality, State of São Paulo, Brazil. Fecal samples from 129 cats were collected by rectal flush technique. It was compared two diagnosis methods, direct examination of feces and PCR. The presence of T. foetus DNA was verified using PCR by amplification of 347-bp fragment from the primers TFR3 and TFR4 and amplicons of positive cases were sequenced. Statistical analyses were performed investigating the associations between T. foetus infection with gender, age, breed, presence of diarrhea and/or history of diarrhea, previous treatment, lifestyle, origin, environment, and co-infection. T. foetus was observed in one sample (n=129) by direct microscopic examination of feces while PCR was positive in five samples (3.9%). Giardia species and Cryptosporidium species co-infection was also observed. Statistical analyses showed no significant associations between T. foetus infection and all listed factors, although most positive cats were asymptomatic and lived in multi-cat household. The isolates of T. foetus showed 100% identical sequences with other T. foetus isolates from cats around the world. So, the occurrence of T. foetus was confirmed in cats in Araçatuba city (Brazil). This parasite must be considered as a differential diagnosis in cats with diarrhea and also in asymptomatic carriers as source of infection in multi-cat environments.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Tritrichomonas foetus em gatos na região do município de Araçatuba, SP, Brasil. Foram coletadas amostras fecais de 129 gatos através da técnica de lavado retal. Dois métodos diagnósticos foram comparados, o exame direto das fezes e a PCR. A presença de DNA de T. foetus foi verificada por meio da PCR através da amplificação de 347 pares de bases a partir dos iniciadores específicos TFR3 e TFR4. Posteriormente, os resultados amplificados das amostras positivas foram sequenciadas. Também foi feita análise estatística a fim de investigar a correlação entre infecção por T. foetus e sexo, idade, raça, presença e/ou histórico de diarreia, tratamento prévio, coinfecção, estilo de vida, origem e tipo de ambiente. O protozoário pôde ser observado em uma amostra através do exame direto das fezes e à PCR foram detectadas cinco amostras positivas (3.9%). Foram detectadas coinfecções por Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Não foram observadas correlações entre infecção por T. foetus e todos os fatores listados anteriormente, embora a maioria dos felinos positivos fossem assintomáticos e vivessem em ambientes multigatos. O resultado do sequenciamento genético dos isolados das amostras positivas mostrou 100% de similaridade com outros isolados de felinos no mundo. Assim, a ocorrência de T. foetus foi confirmada em gatos em Araçatuba, São Paulo, Brasil. Sendo assim, o parasito deve considerado como diagnóstico diferencial em gatos com diarreia assim como em portadores assintomáticos como fontes de infecção em ambientes multigatos.(AU)

Ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil / Infection occurrence of Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com estudo determinar a ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 133 amostras biológicas (muco cervicovaginal e raspado prepucial) de animais, procedentes de oito propriedades, de diferentes regiões do estado. O material biológico coletado foi transferido para solução salina tamponada (PBS) e, posteriormente, inoculado em meios de transporte específicos, Lander para diagnóstico de C. fetus subsp. venerealis e Diamond para T. foetus. Para o diagnóstico das infecções por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus, as amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) e cultivadas em meio ágar Columbia acrescido de antibiótico e Diamond, respectivamente. Para pesquisa de C. fetus subsp. venerealis, observou-se uma ocorrência de 1,8% (2/113) de animais positivos no exame microbiológico com confirmação pela PCR. Em relação à procedência, observou-se que 100% das amostras positivas pertenciam a dois machos do mesmo rebanho. Nenhum animal foi positivo na pesquisa de T. foetus. Este é o primeiro registro da infecção por C. fetus subsp. venerealis em búfalos no Brasil. Apesar da baixa ocorrência, recomenda-se adoção de medidas de controle, com o intuito de se evitar a disseminação do agente para outros rebanhos.(AU)

The objective this study was to determine the occurrence of infection with Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the State of Pernambuco, Brazil. Biological samples were collected (cervico vaginal mucus and shaved prepucial) of 113 animals, coming from 8 properties in different regions of the state. The biological material collected was transferred into phosphate buffered saline (PBS) and inoculated in the specific transport, Lander for diagnosis of C. fetus subsp. venerealis and Diamond for T. fetus subsequently. For the diagnosis of infection by Campylobacter fetus subsp. venrealis and Tritrichomonas foetus the samples were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) grown in Columbia agar plus antibiotics and Diamond, respectively. There was an occurrence of 1.8% (2/113) of positive animals in the microbiological examination with confirmation by PCR, for C. fetus subsp. venerealis. We observed that 100% of positive samples were from two (2) males from the same herd. No animals were positive for T. foetus. This is the first report of infection with C. fetus subsp. venerealis in buffaloes in Brazil. Despite rare occurrence, control measures are recommended in order to prevent the spread of the agent to other herds.(AU)

Prevalence and Molecular Characterization of Intestinal Trichomonads in Pet Dogs in East China

The trichomonad species Tritrichomonas foetus and Pentatrichomonas hominis were recently detected in the feces of dogs with diarrhea. However, little information is available on the prevalence and pathogenicity of these parasites in the canine population. Therefore, the aim of this study was to determine the prevalence and molecular characterization of trichomonads infecting pet dogs in Anhui and Zhejiang provinces, east China. In total, 315 pet dogs, with or without diarrhea, from 7 pet hospitals were included in this epidemiological survey. Microscopy and PCR detected P. hominis in 19.7% (62/315) and 31.4% (99/315) of fecal samples, respectively. T. foetus infection was detected in 0% (0/315) of samples with microscopy and in 0.6% (2/315) with PCR. The prevalence of P. hominis was significantly higher in young dogs (≤12 months) than in adult dogs (>12 months), and was significantly higher in diarrheic dogs (50.6%) than in non-diarrheic dogs (24.3%; P<0.05). Infection with T. foetus did not correlate with any risk factors evaluated in this study. A sequence analysis of the P. hominis PCR products showed minor allelic variations between our sequences and those of P. hominis strains from other hosts in different parts of the world. Type CC1 was the most common strain in dogs in east China. The internal transcribed spacer 1 (ITS1)-5.8S rRNA gene sequences from the 2 T. foetus isolates detected in this study displayed 100% identity and were homologous to the sequences of other strains isolated from domestic cats in other countries.

Co-infection by Tritrichomonas foetus and Pentatrichomonas hominis in asymptomatic cats / Co-infecção por Tritrichomonas foetus e Pentatrichomonas hominis em gatos assintomáticos

Tritrichomonas foetus, a parasite well known for its significance as a venereally transmitted pathogen in cattle, has been identified as a cause of chronic large bowel diarrhea in domestic cats in many countries of the world. In Brazil, several studies on the diagnosis of bovine trichomoniasis have been performed, but until now, no study was made regarding feline trichomoniasis. Thus, this is the first study to report the occurrence of T. foetus and Pentatrichomonas hominis in cats using morphological and molecular analysis. Feces from 77 cats were examined, four of which (5.2%) were positive for the presence of parabasalids. Morphological analysis of stained smears revealed piriform trophozoites showing the three anterior flagella, elongated nucleus and axostyle ending abruptly in fillet, characteristic of T. foetus. In scanning and transmission electron microscopy, identification characters similar to those previously reported for T. foetus were observed. The cultures containing trophozoites were submitted for molecular analysis, which resulted positive for T. foetus DNA using specific primers (TFR3 and TFR4), and all samples were positive and subjected to sequencing in which they showed 99.7-100% similarity with another isolate sequencing of T. foetus (JX960422). Although no trophozoite with consistent morphology of P. hominis has been visualized in the samples, differential diagnosis was performed using specific primers for P. hominis (TH3 and TH5) amplicon. In three of the four samples (3.89%) sequencing revealed 100% similarity when compared with another sequence of P. hominis deposited in Genbank (KC623939). Therefore, the present study revealed through the diagnostic techniques employed the simultaneous infection by T. foetus and P. hominis in the feces of cats. However, it was necessary to use more than one technique for the diagnosis of the co-infection...

Tritrichomonas foetus, um parasito bem conhecido por seu significado como um agente patogênico transmitido venereamente em bovinos, também foi identificado como causa de diarreia crónica do intestino grosso em gatos domésticos em muitos países. No Brasil, vários estudos sobre o diagnóstico de tricomonose bovina foram realizados, mas até agora, não há informação disponível em relação à trichomonose felina. Assim, este é o primeiro estudo a relatar a ocorrência de T. foetus e Pentatrichomonas hominis em gatos por meio de análise morfológica e molecular. Fezes de 77 gatos foram examinadas, a partir da qual quatro (5,2%) foram positivas para a presença de parabasalídeos. A análise morfológica de esfregaços corados revelou trophozoitos piriformes com três flagelos anteriores, núcleo alongado e axóstilo cuja projeção termina abruptamente em formato de filete, características estas de identificação morfológica T. foetus. Além disso, microscopia eletrônica de varredura e transmissão, revelaram caracteres morfológicos semelhantes aos descritos na literatura para esta espécie. A análise molecular de culturas utilizando iniciadores específicos para trofozoítos de T. foetus (TFR3 e TFR4), mostrou que as quatro amostras foram positivas para este parasito e osequenciamento dos fragmentos amplificados demonstraram 99,7-100% de similaridade com seqüências depositadas no GeneBank de T. foetus. Nenhum trofozoíto com morfologia consistente com a descrição de P. hominis foi visualizado nas amostras. No entanto, a análise molecular, utilizando iniciadores específicos para esta espécie (TH3 e TH5) detectou que três das quatro amostras (75%) também foram positivas para P. hominis e o sequenciamento de nucleotideos revelou 100% de similaridade dos amplicons quando comparada com o mesmo fragmento de DNA de P. hominis depositado no GenBank. Como tal, o presente estudo relata a coinfecção de gatos com T. foetus e P. hominis e destacou a exigência de uma combinação de métodos...

IL-10 release by bovine epithelial cells cultured with Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus

Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus are parasitic protists of the human and bovine urogenital tracts, respectively. Several studies have described the cytotoxic effects of trichomonads on urogenital tract epithelial cells. However, little is known about the host cell response against trichomonads. The aim of this study was to determine whether T. foetus and T. vaginalis stimulated the release of the cytokine interleukin (IL)-10 from cultured bovine epithelial cells. To characterise the inflammatory response induced by these parasites, primary cultures of bovine oviduct epithelial cells were exposed to either T. vaginalis or T. foetus. Within 12 h after parasite challenge, supernatants were collected and cytokine production was analysed. Large amounts of IL-10 were detected in the supernatants of cultures that had been stimulated with T. foetus. Interestingly, T. vaginalis induced only a small increase in the release of IL-10 upon exposure to the same bovine cells. Thus, the inflammatory response of the host cell is species-specific. Only T. foetus and not T. vaginalis induced the release of IL-10 by bovine oviduct epithelial cells.

Determination of presence of Tritrichomonas foetus in uterine lavages from cows with reproductive problems / Determinação da presença de Tritrichomonas foetus em lavados uterinos de vacas com problemas reprodutivos

The aim of this study was to determine the presence of Tritrichomonasfoetus in two dairy herds on the Altiplano Cundiboyacense. Twenty-one low-volume uterine lavages from cows with a history of reproductive problems in two dairy herds located in the municipality of Sibaté (Cundinamarca) and Ventaquemada (Boyacá) were evaluated. In the first herd, 10 cows were sampled and in the second, 11 cows, based on three inclusion criteria. The uterine lavages were obtained through infusion of physiological saline solution into the uterine body. The samples were centrifuged and seeded in Tritrichomonas basal medium for 10-15 days at 37 ºC. The protozoa were evaluated on the day of sampling and 10 and 15 days after incubation by means of direct viewing under a dark-field microscope. Positive samples were stained with Wright and Lugol to identify the morphological characteristics. This study showed that T. foetus was present in 61.8% of the animals sampled. The determination that T. foetus was present in 61.8% of the samples analyzed is a significant finding given that in the herds evaluated, this agent had not previously been diagnosed.

O objetivo do presente estudo, foi determinar a presença de Tritrichomonas foetus em dois rebanhos leiteiros no Altiplano Cundiboyacense. De vacas com um histórico de problemas reprodutivos, foram avaliados 21 lavados uterinos de pequeno volume, em dois rebanhos leiteiros localizados nos municípios de Sibaté (Cundinamarca) e Ventaquemada (Boyacá). No primeiro rebanho, 10 vacas foram amostradas e no segundo 11, baseado em três critérios de inclusão. Os lavados uterinos foram obtidos mediante infusão de solução salina fisiológica no corpo do útero. As amostras foram centrifugadas e semeadas em meio de cultura básico para Tritrichomonas por 10-15 dias a 37 ºC. Os protozoários foram avaliados no dia da colheita de amostras e 10 e 15 dias após incubação por meio de visualização direta sob um microscópio de campo escuro. As amostras positivas foram coradas com Wright e Lugol para identificar as características morfológicas. Este estudo mostrou que T. foetus estava presente em 61,8% dos animais amostrados. A determinação de que T. foetus estava presente em 61,8% das amostras analisadas é um achado significativo, dado que nos rebanhos avaliados, esse agente não tinha sido previamente diagnosticado.

Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus: interaction with fibroblasts and muscle cells - new insights into parasite-mediated host cell cytotoxicity

Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus are parasitic, flagellated protists that inhabit the urogenital tract of humans and bovines, respectively. T. vaginalis causes the most prevalent non-viral sexually transmitted disease worldwide and has been associated with an increased risk for human immunodeficiency virus-1 infection in humans. Infections by T. foetus cause significant losses to the beef industry worldwide due to infertility and spontaneous abortion in cows. Several studies have shown a close association between trichomonads and the epithelium of the urogenital tract. However, little is known concerning the interaction of trichomonads with cells from deeper tissues, such as fibroblasts and muscle cells. Published parasite-host cell interaction studies have reported contradictory results regarding the ability of T. foetus and T. vaginalis to interact with and damage cells of different tissues. In this study, parasite-host cell interactions were examined by culturing primary human fibroblasts obtained from abdominal biopsies performed during plastic surgeries with trichomonads. In addition, mouse 3T3 fibroblasts, primary chick embryo myogenic cells and L6 muscle cells were also used as models of target cells. The parasite-host cell cultures were processed for scanning and transmission electron microscopy and were tested for cell viability and cell death. JC-1 staining, which measures mitochondrial membrane potential, was used to determine whether the parasites induced target cell damage. Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labelling staining was used as an indicator of chromatin damage. The colorimetric crystal violet assay was performed to ana-lyse the cytotoxicity induced by the parasite. The results showed that T. foetus and T. vaginalis adhered to and were cytotoxic to both fibroblasts and muscle cells, indicating that trichomonas infection of the connective and muscle tissues is likely to occur; such infections could cause serious risks to the infected host.

Efficacy of Ronidazole for Treatment of Cats Experimentally Infected with a Korean Isolate of Tritrichomonas foetus

To evaluate the efficacy of ronidazole for treatment of Tritrichomonas foetus infection, 6 Tritrichomonas-free kittens were experimentally infected with a Korean isolate of T. foetus. The experimental infection was confirmed by direct microscopy, culture, and single-tube nested PCR, and all cats demonstrated trophozoites of T. foetus by day 20 post-infection in the feces. From day 30 after the experimentally induced infection, 3 cats were treated with ronidazole (50 mg/kg twice a day for 14 days) and 3 other cats received placebo. Feces from each cat were tested for the presence of T. foetus by direct smear and culture of rectal swab samples using modified Diamond's medium once a week for 4 weeks. To confirm the culture results, the presence of T. foetus rRNA gene was determined by single-tube nested PCR assay. All 3 cats in the treatment group receiving ronidazole showed negative results for T. foetus infection during 2 weeks of treatment and 4 weeks follow-up by all detection methods used in this study. In contrast, rectal swab samples from cats in the control group were positive for T. foetus continuously throughout the study. The present study indicates that ronidazole is also effective to treat cats infected experimentally with a Korean isolate of T. foetus at a dose of 50 mg/kg twice a day for 14 days.

Interaction of Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus with keratin: an important role in parasite infection

Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus are human and bovine parasites, respectively, that provoke the sexually transmitted disease trichomoniasis. These extracellular parasites adhere to the host epithelial cell surface. Although mucinases and proteases have been described as important proteins for parasite adhesion to epithelial cells, no studies have examined the role of the keratin molecules that cornify the vaginal epithelium. Here, we investigated the interaction of T. vaginalis and T. foetus with human keratin in vitro; additionally, adherence assays were performed in cattle with T. foetus to elucidate whether trichomonads were able to interact with keratin in vivo. We demonstrated that both T. vaginalisand T. foetusinteracted directly with keratin. Additionally, the trichomonads ingested and digested keratin, shedding new light on the Trichomonas infection process.

First Report of Feline Intestinal Trichomoniasis Caused by Tritrichomonas foetus in Korea

Feline intestinal tritrichomoniasis by Tritrichomonas foetus was first recognized in USA in 1999 and has so far been reported from UK, Norway, Switzerland, and Australia, but not from the Far East Asian countries. In November 2008, 2 female and male littermate Siamese cats, 6-month old, raised in a household in Korea were referred from a local veterinary clinic with a history of chronic persistent diarrhea. A direct smear examination of fecal specimens revealed numerous trichomonad trophozoites which were isolated by the fecal culture in InPouch(TM) TF-Feline medium. A PCR testing of the isolate based on the amplification of a conserved portion of the T. foetus internal transcribed spacer (ITS) regions (ITS1 and ITS2) and the 5.8S rRNA gene, and the molecular sequencing of the PCR amplicons confirmed infection with T. foetus. This is the first clinical case of feline intestinal trichomoniasis caused by T. foetus in Korea.

Leptospirose e tritricomonose: isolamento em propriedade com problemas reprodutivos no sul do Brasil / Leptospirosis and tritrichomonosis: property in isolation with reproductive problems in southern Brazil / Leptospirosis y tritricomonosis: aislamiento en propiedad con problemas reproductivos en el sur de Brasil

O objetivo do estudo foi pesquisar quais os agentes etiológicos presentes em touros de duas propriedades rurais com elevados índices de repetição de cio. Da propriedade A foram analisados 23 touros, dos 58 integrados no rebanho, e na propriedade B foram analisados 15 reprodutores. Destes animais, foi colhido sangue para exame de leptospirose e realizado lavado prepucial para cultura de tritricomonose. Na propriedade A, em nenhuma das amostras avaliadas isolou-se trofozoítas de Tritrichomonas foetus. No soro de 15 touros (65,2%) testados para Leptospira foi verificada reação para um ou mais sorovares de L. hardjo, L. wolffi, L. icterohaemorrhagiae e L. butembo, em titulações que oscilaram entre 1/100 e 1/400. Na propriedade B não foi verificada titulação para leptospirose, mas em um dos animais isolaram e reproduziram trofozoìtas de T. foetus em laboratório. Do restante dos animais, cinco foram considerados suspeitos em microscópico óptico, não sendo confirmado o parasitismo em lâmina corada com Giemsa. Todos os bovinos da propriedade A foram submetidos ao tratamento com sulfato de estreptomicina em dose única de 25mg kg-1. O animal positivo para T. foetus foi descartado e os demais estão sendo monitorados mensalmente. Tanto Leptospirose como tritricomonose são enfermidades capazes de acarretar problemas reprodutivos em bovinos no sul do Brasil.

The aim of this study was to research the etiological agents present in bulls from a property with high estrus repetition rate. Twenty three out of 58 bulls in the property A and 15 of the property B were analyzed. Blood samples and preputial washes for leptospirosis and tritrichomonosis research were collected, respectively. In the property A, none of the evaluated animals showed the presence of Tritrichomonas foetus trophozoites, although 15 bulls (65,2%) tested for Leptospira reacted with one or more sorovars of L. hardjo, L. wolffi, L. icterohaemorrhagiae and L. butembo with titles between 100 and 400. Animals from property B were negative for leptospirosis and the isolation and reproduction of T. foetus in laboratory was possible only in one animal. Five other animals were considered suspect in the direct smear technique, although they were negative in the Giemsa staining method. All animals from property A received a single dose of streptomycin sulfate (25mg kg-1) which drastically reduced the estrus repetition rate. The animal with tritrichomonosis was taken out of the herd and the others have been monitored monthly. Even leptospirosis as tritrichomonosis are diseases directly linked with reproductive problems in southern Brazil.

El objetivo de este estudio fue investigar cuales son los agentes etiológicos presentes en toros de dos propiedades rurales con elevados índices repetitivos de celo. De la propiedad “A” fueron analizados 23 toros, de los 58 que integran el rebaño, en la propiedad “B” fueron analizados 15 reproductores. De estos animales, se extrajo muestras de sangre para examen de leptospirosis y se realizó lavado prepucial para cultivo de tritricomonosis. En la propiedad “A”, en ninguna de las muestras evaluadas se aisló trofozoítos de Tritrichomonas foetus, ya en el suero de 15 toros (65,2%) testeados para Leptospira fue verificada reacción para uno o más sorovares de L. hardjo, L. wolffi, L. icterohaemorrhagiae y L. butembo en titulaciones que oscilaron entre 1/100 y 1/400. En la propiedad “B” no fue verificada titulación para leptospirosis, pero en uno de los animales se aisló y se reprodujeron trofozoítos de T. foetus en laboratorio. En los demás animales, cinco fueron considerados sospechosos en microscopio óptico, no siendo confirmado el parasitismo en lámina coloreada con Giemsa. Todos los bovinos de la propiedad A fueron sometidos al tratamiento con sulfato de estreptomicina en dosis única de 25mg kg-1. El animal positivo para T. foetus fue descartado y los demás están siendo monitoreados mensualmente. Tanto Leptospirosis como tritricomonosis son enfermedades capaces de provocar problemas reproductivos en bovinos en el sur de Brasil.

Construção de iniciadores e otimização de ensaios de PCR e de nested-PCR para a detecção específica de Tritrichomonas foetus / Primers design and optimization of PCR and nested-PCR assays for the specific detection of Tritrichomonas foetus

Tritrichomonas foetus é um protozoário patogênico responsável por doença venérea em bovinos conhecida por tricomonose genital bovina. A tricomonose bovina é uma doença venérea causada pelo protozoário cujo habitat natural é o trato genital. Os protocolos já desenvolvidos para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou são incapazes de distinguir T. foetus das outras espécies do gênero. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de estabelecer e otimizar protocolos de ensaio de PCR e nested-PCR para o diagnóstico específico de T. foetus, empregando-se novos iniciadores, selecionados do alinhamento das seqüências dos genes 18S rRNA, 5,8S rRNA, 28S rRNA e dos espaços transcritos do rDNA (ITS1 e ITS2). Um par de iniciadores foi construído para amplificação gênero-específica de um fragmento de 648 pares de base e outros dois para a obtenção de produtos espécie- específicos de 343 e 429 pb. Nenhuma reação cruzada foi observada frente ao DNA genômico de Bos taurus ou de microrganismos responsáveis por infecções genitais. A sensibilidade dos ensaios de PCR e de nested-PCR apresentados neste estudo permitiu um limiar de detecção de até dois parasitos.

Tritrichomonas foetus is a pathogenic protozoan that causes a venereal disease in cattle known as bovine genital tricomonosis. In spite of the efficacy to recognize the target genomic DNA, the protocols so far developed for the diagnosis of this organism by PCR promote some inespecific amplifications or they are unable to discriminate T. foetus against other species within the genus. The objective of this study was to assess and optimize PCR and nested-PCR assays for the specific diagnosis of T. foetus, using novel primers selected from the alignment of sequences of the genes 18S rRNA, 5.8S rRNA, 28S rRNA and of the internal transcribed spacers of the rDNA (ITS1 and ITS2). A pair of primers was constructed for the genus-specific amplification of a 648 bp fragment and two others to amplify T. foetus species-specific fragments of 343 and 429 bp. No cross amplification was observed against Bos taurus genomic DNA neither against the DNA of usual bovine genital pathogens. Both, single and nested-PCR assays, presented analytical sensitivity to detect at least two T. foetus organisms.

Viabilidade de Tritrichomonas foetus após congelamento com diferentes crioprotetores / Viability of Tritrichomonas foetus after freezing with diferents cryoprotectors

Este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de um isolado de Tritrichomonas foetus criopreservada com glicerol e dimetilsulfóxido (DMSO) a -196ºC. Isolados do protozoário foram descongeladas dois dias após o congelamento e 6, 12, 18 e 26 meses, para avaliação de sua viabilidade. Em todos os tempos analisados, o congelamento foi viável em 60 por cento e 90 por cento das amostras congeladas com glicerol a 10 por cento e DMSO a 12 por cento, respectivamente.

The aim of this work was to evaluate the viabilitity of Tritrichomonas foetus cryopreservated with glycerol and dimethilsulphosyde (DMSO) at -196ºC. Samples of the protozoa were thaw two days and 6, 12, 18, and 26 months after freezing to be evaluated. In the time analyzed, the freezing was viable in 60 percent and 90 percent of freeze samples with glycerol at 10 percent and DMSO at 12 percent, respectively.

Experimentally induced intravaginal Tritrichomonas foetus infection in a mouse model

A necessidade de esclarecer a relação agente-hospedeiro na tricomoníase bovina deu motivo para o uso de modelos experimentais alternativos ao bovino. O camundongo BALB/c resultou como espécie mais adequada para a infeção vaginal com Tritrichomonas foetus, requerendo uma estrogenização prévia. Visando a necessidade de um modelo experimental sem estrogenização persistente e com ciclos estrais normais, foi avaliada a instalação e persistência da infeção vaginal no camundongo BALB/c com diferentes quantidades de T. foetus, em dois grupos experimentais. O Grupo A foi tratado com 5µg de 3-benzoato de beta estradiol, para sincronizar o estro, 48 h antes da inoculação vaginal com T. foetus, e o Grupo B foi inoculado durante o estro natural. O efeito do 3-benzoato de beta estradiol decresceu gradualmente. A totalidade dos animais ciclaram regularmente após 5-7 dias pós-tratamento. Após a primeira semana pós-infecção, todos os animais foram amostrados durante 34 semanas, para avaliar o andamento da infeção vaginal e o estádio de cío. O Grupo A apresentou 93,6% de animais infetados e o Grupo B 38%. Com diferentes dosagens de T. foetus se obteve a instalação e persistência da infecção vaginal durante 34 semanas. Embora tenham-se registrados diferentes comportamentos entre cada um dos lotes dos Grupos A e B, não houveram diferenças significativas entre as doses infectantes. O tratamento com 3-benzoato de beta estradiol teve efeito favorável na instalação da infecção (P<0,0001), porém não teve influência na persistência (P= 0,1097). Em função dos resultados obtidos, apresenta-se um modelo experimental em camundongo, adequado para aprofundar estudos sobre mecanismos de patogenicidade, resposta imune, avaliação protetora de imunógenos e o efeito terapêutico de fármacos.

Immunohistochemical detection of Tritrichomonas foetus in experimentally infected mice

A necessidade de aumentar o conhecimento da patogenia da tricomoníase genital bovina (BGT) conduziu ao uso de modelos experimentais alternativos como o camundongo. Näo obstante, é necessário elucidar a dinâmica da infecçäo nesta espécie e avaliar as diferentes fases da colonizaçäo e evoluçäo das alterações patológicas. A imunohistoquímica (IHQ) oferece vantagens sobre as técnicas histoquímicas de rotina para a observaçäo do protozoário em tecidos, detritos celulares e dentro de macrófagos. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar pelo uso de uma técnica de IHQ a presença de Tritrichomonas foetus no sistema reprodutivo de camundongos infectados. Camundongos BALB/c fêmeas foram infectados pela via intravaginal, com uma suspensäo de T. foetus, na fase de estro, detectado com citologia exfoliativa vaginal. Depois de 10 semanas, os animais foram sacrificados; útero e vagina forma fixados e processados para histologia. Alguns cortes foram corados com HE. O restante dos cortes foi processado para IHQ. Foi usado um soro policlonal imunoadsorvido anti-T. foetus. A técnica de avidina-biotina (HistoMouse, ZymedÖ) foi empregada. Os estudos histopatológicos mostraram uma dilataçäo das glândulas uterinas, presença de macrófagos no lúmen do órgäo e parte interna das glândulas endometriais. T. foetus näo foi identificado por esse método. A IHQ permitiu identificar as mesmas lesões observadas e a presença do protozoário no endométrio, nas glândulas endometriais, no lúmen uterino e dentro de neutrófilos e macrófagos. O estudo citológico em lâminas coradas por IHQ, mostrou T. foetus aderido a células epiteliais, ou dentro de macrófagos. Esta técnica demonstra ser uma ferramenta útil para o estudo da patogenia da tricomoníase genital bovina (BGT) utilizando-se o camundongo como modelo experimental.

Isolation and biochemical characterization of the plasma membrane of Tritrichomonas foetus

A fraction containing plasma membrane-enriched vesicles has been prepared from Tritrichomonas foetus. Cells were ruptured using a Potter type homogenizer, under well controlled conditions, and membranes were isolated by differential centrifugation and in discontinuous sucrose gradient. This fraction was enriched 8 and 10-fold in the plasma membrane marker enzymes 5'-nucleotidase and (Na+ + K+)-dependent, ouabain-sensitive ATPase, respectively. Determination of Glucose-6-phosphatase and NADPH cytochrome c reductase activities in this fraction, indicates a minimal contamination with endoplasmic reticulum membranes. Analysis by Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide (SDS-PAGE) gradient gel showed that the plasma membrane fraction contains several proteins with major bands corresponding to apparent molecular weights of 48, 45, 39, 37, 32, 30, 27, 23, 20, 19, 17, and 15 kDa.